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液相色谱仪HPLC(六)化学发光检测器
发表时间:2022/3/28 13:41:16  |  点击率:1201

液相色谱仪HPLC的化学发光检测器原理:化学发光是指在没有任何光、电、热的作用下,只是由于反应体系中某种物质(反应物、产物、中间体或荧光物质)的分子吸收了反应所释放的能量而由基态跃迁至激发态,然后再从激发态返回基态,同时将能量以光辐射的形式释放出来,产生化学发光的现象。在固相、液相、气相反应中均能观察到化学发光。

由于物质激发态的能量是来自化学反应,故叫作化学发光。当分离组分从色谱柱中洗脱出来后,立即与适当的化学发光试剂混合,引起化学反应,导致发光物质产生辐射,其光强度与该物质的浓度成正比。

液相色谱仪HPLC的化学发光检测器不需要光源,也不需要复杂的光学系统,只要有恒流泵,将化学发光试剂以一定的流速泵入混合器中,使之与柱流出物迅速而又均匀地混合产生化学发光,通过光电倍增管将光信号变成电信号,就可进行检测。这种检测器的最小检出量可达10~12g。

化学发光反应的两个关键步骤: 激发和发射。

第一是反应必须能够提供足够的激发能。通常只有那些反应速度相当快的放能反应,其焙变介于170-300kJ/mol之间,才能在可见光范围内观察到化学发光现象。

第二是化学反应的能量至少能被一种物质所接受并产生激发态。

第三是处于激发态的分子或原子能够释放出光子或者将其能量转移给另一个分子,使此分子激发,然后以辐射光子的形式回至基态。

化学反应要产生化学发光需满足的条件:

第一,该反应必须能够提供足够的能量且可以被某种反应产物或是中间体吸收,使之处于激发态,在许多氧化还原反应中所提供的能量都能满足此条件,因此大多数氧化还原反应都是化学发光反应;

第二,化学反应的能量至少能被一种物质所接受并使之生成激发态。对于有机分子的液相化学发光而言,从能量上看,容易生成激发态产物的往往是一些芳香族化合物和拨基化合物;

第三,处于激发态的分子或原子必须具有一定的化学发光量子效率使其能释放出光子,或者能够转移它的能量给另一个分子使之进入激发态并释放出光子。由此可见,能够用于HPLC柱后检测的化学发光是由一些高能量、不放热、不做电功或其它功的化学反应所释放的能量,去激发体系中某些化学物质分子而产生的次级光发射, 利用产生的化学发光来对经色谱分离的被分析化合物进行测定

 

液相色谱仪HPLC化学发光检测器的优点

化学发光检测器( CD)是近年来发展起来的一种快速、灵敏的新型检测器,具有设备简单、价格低廉、线性范围宽等优点。
1灵敏度高

2选择性好,仅对被测组分有响应

3样品可直接分析,不需要前处理

4新型检测器

5结构简单

6线性范围宽

3. 缺点
使用的反应气或化学发光反应产物经常是危险性的气体

在众多的液相色谱仪HPLC检测器中,化学发光检测器(CLD)结构简单,灵敏度高。在大多数情况下,它的灵敏度比紫外一可见光检测器高2-3个数量级,由于它没有光源,不存在散射光引起的背景,用于荧光物质检测时,灵敏度比荧光检测器更高,对某些物质的检测甚至可与激光诱导荧光检测器媲美,灵敏度可达10-21mol的单分子水平。将高灵敏度的化学发光检测器与高分辨的高效液相色谱(HPLC)分离手段以适当的方式相祸合,集分离与分析之精华于一体,发展成为一种理想的分析方法。

 

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